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心肌细胞线粒体ATP合成效率监测分析

原创版权 关键字:心肌细胞线粒体ATP合成效率监测分析,第三方检测机构,中析研究所 相关: 发布时间: 2025-07-28 10:12:20

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

呼吸功能检测:

  • 耗氧率(OCR):基础OCR、最大OCR(参照ISO10993-5)
  • ATP产生速率:实时ATP释放量(pmol/min)
  • 细胞外酸化率(ECAR):乳酸产生指数(±0.1pH单位)
酶活性分析:
  • 复合体I活性:NADH氧化速率(IU/mg蛋白)
  • ATP合酶活性:磷酸化效率(≥85%)
  • 琥珀酸脱氢酶(SDH)活性:比活性(参照ASTMF2312)
膜电位评估:
  • ΔΨm(膜电位):荧光强度变化(RFU)
  • 质子泄漏率:基础泄漏(mV/s)
  • 钙离子驱动的电位振荡:频率(Hz)
代谢产物检测:
  • ATP/ADP比率:核苷酸定量(≥1.5)
  • NAD+/NADH比率:氧化还原状态(荧光探针法)
  • 活性氧(ROS)水平:超氧阴离子浓度(μM)
形态学指标:
  • 线粒体数量密度:每细胞线粒体计数(个/μm²)
  • 碎片化指数:形态评分(0-5级)
  • 嵴结构完整性:电子显微镜评估
基因表达检测:
  • PGC-1αmRNA水平:相对表达量(qPCRCt值)
  • TFAM蛋白表达:Westernblot定量(灰度值)
  • 线粒体DNA拷贝数:实时PCR测定
病理响应指标:
  • 缺氧耐受性:OCR衰减率(%)
  • 缺血再灌注损伤效率:ATP恢复时间(min)
  • 药物干预响应:EC50值(nM)
钙动态监测:
  • 钙摄取速率:荧光探针斜率(AU/s)
  • 钙振荡幅度:峰-谷差异(ΔF/F0)
  • 钙火花频率:事件计数(次/min)
能量效率计算:
  • ATP合成/OCR比值:耦合效率(≥0.8)
  • 呼吸控制比率(RCR):状态3/状态4(参照GB/T39144)
  • 质子动力生成:Δp计算(mV)
综合功能评分:
  • 线粒体健康指数:多参数整合(0-100分)
  • 应激响应评分:ROS与OCR关联分析
  • 老化相关效率损失:年衰减率(%)

检测范围

1.原代心肌细胞培养物:评估正常与缺氧条件下ATP合成效率变化,重点检测OCR动力学及ATP产量衰减。

2.心肌组织切片:分析区域性ATP合成差异,侧重膜电位与酶活性在组织层面的分布。

3.缺血再灌注心脏模型:量化ATP合成恢复动态,检测重点为OCR反弹率及钙离子泄漏。

4.心力衰竭动物模型:监测ATP合成效率衰减,聚焦呼吸链复合体活性与ROS水平。

5.心肌干细胞分化的细胞:评估分化中ATP合成成熟度,检测ATP产生速率与形态学指标。

6.人类心肌活检样本:临床ATP合成效率分析,侧重病理状态下酶活性偏差。

7.三维心肌组织工程构建体:组织水平ATP合成监测,重点检测ECAR与OCR耦合效率。

8.心肌细胞系(如H9c2):标准化ATP合成测试,检测药物干预响应与基础OCR。

9.冷冻保存心肌细胞:分析冻融对ATP合成影响,聚焦膜电位稳定性及ATP恢复率。

10.药物处理心肌细胞:评估化合物调控效率,检测ATP/ADP比率变化与毒性阈值。

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-5:2021医疗器械生物学评价细胞毒性测试
  • ASTMF2312-19细胞代谢活性标准指南
  • ISO15197:2013体外诊断系统葡萄糖检测
国家标准:
  • GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分细胞毒性试验
  • GB/T39144-2020细胞能量代谢检测方法
  • GB/T34801-2017细胞培养质量控制规范
方法差异说明:ISO标准优先氧电极法测定OCR,GB标准推荐荧光探针法;ASTM指南包含实时ATP监测,GB/T39144强调比色法验证;国际标准侧重高通量筛选,国家标准整合病理模型验证。

检测设备

1.细胞呼吸分析仪:AgilentSeahorseXFe24型(OCR分辨率0.1pmol/min)

2.高分辨率荧光显微镜:OlympusIX83型(物镜NA1.42,CCD分辨率2048x2048)

3.流式细胞仪:BDFACSAriaIII型(激光波长488nm,发射检测530/30nm)

4.微孔板读板机:MolecularDevicesSpectraMaxi3x型(波长范围250-1000nm)

5.ATP生物发光检测系统:PromegaGloMaxDiscover型(检测限0.1nMATP)

6.高效液相色谱仪:Agilent1260InfinityII型(流速范围0.1-5mL/min)

7.共聚焦显微镜:LeicaTCSSP8型(扫描速度8kHz,Z轴分辨率0.5μm)

8.细胞培养系统:ThermoScientificHeracell150i型(CO2控制精度±0.1%)

9.离心机:Eppendorf5430R型(最大RCF30,000xg)

10.实时PCR仪:Bio-RadCFX96Touch型(升温速率5°C/s)

11.低温储存罐:Taylor-WhartonCX300型(温度维持-196°C)

12.电子天平:MettlerToledoXS205型(称量精度0.01mg)

13.pH计:HannaInstrumentsHI2211型(分辨率0.001pH)

14.恒温振荡器:ShelLabSI600型(转速范围10-300rpm)

15.超纯水系统:MilliporeMilli-QDirect型(电阻率18.2MΩ·cm)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

本文链接:https://www.yjser.com/huanjingjiance/23938.html

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