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发光细菌法适用于水质、工业废水、纳污水体及实验室条件下可溶性化学物质的水质等急性毒性检测。发光细菌法水质急性毒性检测是一种简便快速的生物毒性检测方法,它不仅能测试理化法所能测定的单因子指标,尤其能快速准确的测试出环境的综合毒性指标,具有理化法和传统生物监测法无可比拟特点。
发光细菌法适用于各种环境水样的毒性检测,包括自然水体、废水、饮用水等。它可以检测多种有机和无机物质对细菌的急性毒性,如重金属、农药、工业化学品等。
1、方法提要
基于发光细菌相对发光度与水样毒性组分总浓度呈显著负相关伊< 0.05),因而可通过生物发光光度计测定水样的相对发光度,以此表示其急性毒性水平。
水质急性毒性水平按8所述条件选用相当的参比毒物氯化汞浓度(以mg/L为单位)来表征,或选用ECSO值(半数有效浓度一一以样品液百分浓度为单位)来表征。
2、发光细菌法简介
2.1 发光细菌法的原理
发光细菌是一类非致病的革兰氏阴性兼性厌氧细菌,最适温度20~ 30℃,pH6~ 9,N aCl 浓度3% ,在正常的生理条件下能够发射可见荧光的细菌,这种可见荧光波长在450~490nm 之间,在黑暗处肉眼可见, 发光细菌法是利用灵敏的光电测量系统测定毒物对发光细菌发光强度的影响。毒物的毒性可以用EC50表示,即发光细菌发光强度降低50%时毒物的浓度。发光细菌含有荧光素、荧光酶、ATP 等发光要素,在有氧条件下通过细胞内生化反应而产生微弱荧光。当细胞活性升高,处于积极分裂状态时,其ATP含量高,发光强度增强。发光细菌在毒物作用下,细胞活性下降,ATP含量水平下降,导致发光细菌发光强度的降低。实验显示,毒物浓度与菌体发光强度呈线性负相关关系,因而,可以根据发光细菌发光强度判断毒物毒性大小,用发光度表征毒物所在环境的急性毒性。
2.2 发光细菌法测定方法
(1) 新鲜发光细菌培养物测定法
将发光细菌接种于液体发光培养基中,在适当条件下(约20℃) 通气培养12小时(对数生长期),用缓冲液稀释至适当的菌浓度后加入测试管中与试液混合10-20分钟,读出样品管和对照管的光强度。
(2) 发光细菌和藻类混合测定法
有些有毒物对发光细菌无直接的毒害作用,而对藻类有毒害作用,利用这一特性,把培养好的发光菌悬液和藻类悬液混合后加入测试管中与试液混合,经光照一段时间后测定发光菌的光强度变化,由于毒物对藻类的毒害而干扰藻类的光合作用,使之放氧能力下降,发光菌因缺氧其放光能力也随机下降,因此可以根据光合作用放氧多少而导致发光菌发光强度的变化来推算出毒物毒性的大小。
(3) 发光细菌冷冻干燥制剂测定法
将培养到对数生长期的发光细菌采用特殊方法制成干燥粉剂保藏于冰箱中,使用时取出加入缓冲液保温平衡5-10分钟,使其恢复到原来的生理状态和发光水平,然后用于测试。
GB/T 15441-1995 水质 急性毒性的测定 发光细菌法
DB37/T 4298-2020 绿潮次生毒性的快速检测方法 发光细菌法
DB44/T 1946-2016 生物毒性水质自动在线监测仪技术要求 发光细菌法
SN/T 5103-2019 国境口岸饮用水生物毒性发光细菌检测方法
发光细菌法水质急性毒性检测涉及的仪器设备列举:手持式发光细菌生物毒性检测仪、在线发光细菌毒性监测系统、发光细菌法现场应急毒性快速检测仪等
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