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质粒浓度检测

原创版权 关键字:质粒浓度测试周期 相关: 发布时间: 2025-06-30 19:41:02

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

浓度测定:

  • 浓度值:ng/μl(检测范围:0.1-3000ng/μl,参照标准ISO 20391-2)
  • 总量计算:μg(基于样品体积,误差±5%)
  • 线性范围:R²≥0.99(适用于稀释系列)
纯度分析:
  • A260/A280比值:理想值≥1.8(蛋白质污染指标)
  • A260/A230比值:理想值≥2.0(盐类污染指标)
  • 核酸杂质:百分比含量≤1%(RT-PCR验证)
完整性检测:
  • 超螺旋比例:≥80%(琼脂糖凝胶电泳法)
  • 切口/开环DNA:≤15%(参照标准ISO 20391-1)
  • 片段大小:kb级确认(误差±200bp)
稳定性测试:
  • 降解率:≤5%/月(-80°C储存条件)
  • 热稳定性:Tm值偏差±1°C(DSC法)
  • pH耐受性:7.0-8.5范围稳定(光谱监测)
污染检测:
  • 内毒素水平:≤0.1EU/μg(LAL法)
  • 宿主DNA残留:≤10ng/μg(qPCR检测)
  • RNA污染:A260/A280异常值修正
功能性验证:
  • 转染效率:≥70%(细胞系测试)
  • 限制性酶切:片段回收率≥90%(参照标准ISO 20391-3)
  • 克隆成功率:CFU计数偏差±10%
光学特性:
  • 吸光度一致性:CV≤2%(多波长扫描)
  • 荧光背景:RFU值≤100(染料干扰排除)
  • 浊度影响:A320≤0.05
定量精度:
  • 重复性:RSD≤3%
  • 准确度:回收率95-105%
  • 检测限:LOD 0.05ng/μl(参照标准ISO 11843)
分子量确认:
  • 迁移率校准:标准品偏差±5%
  • 质粒大小:kb精确测定(脉冲场电泳)
  • 拓扑结构:cccDNA比例(超速离心法)
储存评估:
  • 冻融循环耐受:≤3次活性损失(活力测试)
  • 长期稳定性:24个月有效期验证
  • 缓冲兼容性:不影响A260读数

检测范围

1. 细菌质粒提取物: 涵盖大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等宿主来源,重点检测浓度准确性和宿主DNA残留去除效果

2. 转染级质粒: 适用于哺乳动物细胞转染,侧重低内毒素水平和超螺旋比例完整性验证

3. 克隆载体质粒: 包括pUC19、pBR322等小型质粒,检测重点为限制性酶切位点完整性和克隆效率

4. 表达载体质粒: 如pET系列,侧重启动子区域稳定性和蛋白表达一致性测试

5. 临床样本质粒: 来自基因治疗或疫苗开发,重点监控无菌条件和降解风险

6. 高通量筛选质粒: 用于文库构建,检测批量样本的浓度均匀性和交叉污染排除

7. 修饰质粒样品: 如甲基化或标记质粒,侧重修饰位点完整性和信号强度验证

8. 冻干质粒制剂: 复溶后样本,检测水分残留≤1%和浓度恢复率≥95%

9. 混合质粒样本: 多质粒共提物,重点区分各组分浓度和纯度交叉影响

10. 环境样本质粒: 土壤或水体提取,检测微生物污染背景和低浓度灵敏度

检测方法

国际标准:

  • ISO 20391-2:2018 分子生物学-质粒DNA定量(分光光度法)
  • ISO 20391-1:2017 质粒完整性评估(电泳法)
  • ISO 11843-1:2019 检测能力确定(荧光定量法)
国家标准:
  • GB/T 34798-2017 核酸浓度检测(紫外分光光度法)
  • GB/T 37870-2019 质粒DNA纯度测定(比值法)
  • GB/T 40149-2021 分子生物学样本稳定性测试
方法差异说明:ISO标准更侧重荧光法的高灵敏度(LOD 0.01ng/μl),而GB标准优先紫外法,适用于常规样本;国际方法要求严格缓冲条件控制,国家标准允许更宽泛PH范围。

检测设备

1. 紫外-可见分光光度计: NanoDrop One(波长范围190-840nm,分辨率0.001Abs)

2. 荧光定量仪: Qubit 4.0(检测限0.1ng/μl,动态范围0.1-1000ng)

3. 琼脂糖凝胶电泳系统: Bio-Rad PowerPac(电压范围50-300V,凝胶浓度0.8-2%)

4. 实时荧光定量PCR仪: Applied Biosystems 7500(温控精度±0.1°C,多通道检测)

5. 超微量核酸分析仪: Thermo Fisher NanoDrop(样品量1-2μl,自动路径校正)

6. 离心机: Eppendorf Centrifuge(转速范围500-15000rpm,温控-20°C至40°C)

7. 酶标仪: BioTek Synergy(波长扫描190-900nm,孔板兼容性)

8. 脉冲场电泳仪: CHEF-DR III(分离范围10kb-10Mb,电场角度可调)

9. 超速离心机: Beckman Optima(转速最高150000rpm,密度梯度分析)

10. 微量分光光度计: DeNovix DS-11(双光束设计,检测重复性CV≤1%)

11. 恒温混匀仪: Thermo Mixer(温度范围4-99°C,震荡速度300-1400rpm)

12. 核酸定量工作站: Agilent TapeStation(自动化样本处理,通量96孔/小时)

13. 荧光显微镜: Olympus IX73(激发波长470nm,分辨率0.2μm)

14. 低温存储设备: Thermo Scientific Freezer(温度范围-86°C,稳定性±1°C)

15. PH计: Mettler Toledo(精度±0.01,缓冲液校准)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

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