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核酸浓度检测

原创版权 关键字:核酸浓度测试标准 相关: 发布时间: 2025-06-30 19:41:13

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

浓度测定:

  • DNA浓度:ng/μL(参照ISO 20395)
  • RNA浓度:ng/μL(检测范围1-1000ng/μL)
  • 绝对定量:拷贝数/mL(偏差±5%)
纯度评估:
  • A260/A280比值:≥1.8(理想范围1.8-2.0)
  • A260/A230比值:>2.0(参照GB/T 34796)
  • 污染物残留:吸光度值≤0.05
完整性检测:
  • 电泳条带:清晰无降解(参照ISO 21571)
  • RIN值:≥7.0(RNA完整性指数)
  • 片段大小分布:主峰占比≥90%
定量分析:
  • 相对定量:ΔΔCt值(CV≤5%)
  • 标准曲线线性:R²≥0.99
  • 内标回收率:90%-110%
稳定性测试:
  • 储存稳定性:浓度变化≤10%(-20°C下)
  • 温度稳定性:在4°C至37°C范围稳定
  • 冻融循环:≤3次变化率≤15%
特异性验证:
  • 特异性:无交叉反应(检测限≤10 copies/μL)
  • 目标序列匹配:同源性≥95%
  • 背景噪声:信噪比≥3:1
敏感性检测:
  • 检测下限:LOD值≤1 copy/μL
  • 定量下限:LOQ值≤5 copies/μL
  • 动态范围:10^2至10^9 copies
重复性分析:
  • 批内变异:CV≤5%
  • 批间变异:CV≤10%
  • 操作员间差异:偏差±3%
准确性验证:
  • 回收率:90%-110%(参照ASTM E3135)
  • 偏差:±5%
  • 标准物质比对:一致性≥98%
兼容性测试:
  • 试剂兼容性:无抑制效应
  • 仪器兼容性:符合标准接口
  • 样本类型适配:浓度范围兼容

检测范围

1. 血液样本DNA: 从全血或血清提取,检测重点为浓度准确性和A260/A280比值,避免溶血干扰。

2. 组织RNA: 来源于新鲜或冷冻组织样本,强调完整性检测如RIN值,防止RNase降解。

3. 细胞培养核酸: 细胞系或原代细胞提取物,关注定量重复性和纯度优化。

4. 环境样本核酸: 如水或土壤提取物,侧重低浓度检测下限和污染物去除效率。

5. 法医样本DNA: 微量或降解样本,要求高灵敏度和特异性验证。

6. 病毒RNA: 如呼吸道病毒核酸,检测关键为快速定量和稳定性测试。

7. 植物基因组DNA: 含多糖多酚样本,重点在纯度评估和A260/A230比值控制。

8. 细菌DNA: 从培养物提取,检测浓度范围1-1000ng/μL和完整性。

9. 古DNA样本: 高度降解样本,强调修复后浓度检测和低量分析。

10. 合成寡核苷酸: 合成产物,验证序列正确性和浓度一致性。

检测方法

国际标准:

  • ISO 21571:2005 食品中核酸提取与定量方法
  • ISO 20395:2019 核酸定量通用技术要求
  • ASTM E3135-18 紫外分光光度法测定核酸浓度
  • ISO 17822:2020 荧光法核酸定量规范
  • ISO 17025:2017 检测实验室通用要求
国家标准:
  • GB/T 37871-2019 核酸浓度测定方法
  • GB/T 34796-2017 核酸纯度检测技术规范
  • GB/T 40146-2021 高通量核酸定量标准
  • GB/T 30987-2014 生物样本核酸提取方法
  • GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范
(方法差异说明:ISO标准在样本处理步骤更注重通用性,而GB标准在特定样本类型如环境核酸有细化要求;ASTM与GB在吸光度测量参数上存在精度差异)

检测设备

1. 紫外分光光度计: NanoDrop 2000c(波长范围190-840nm,精度±1%)

2. 荧光定量PCR仪: QuantStudio 5(动态范围10^9,多通道检测)

3. 微孔板读数仪: SpectraMax i3x(支持荧光和吸光度,检测限低至0.1ng/μL)

4. 电泳系统: Bio-Rad Gel Doc XR+(分辨率达0.1μg,成像速度≤5秒)

5. 毛细管电泳仪: Agilent 2100 Bioanalyzer(片段大小分析范围25-12000bp)

6. 核酸定量仪: Qubit 4.0(荧光检测灵敏度≤0.1pg/μL)

7. 离心机: Eppendorf 5430R(转速30000rpm,温控精度±0.1°C)

8. 核酸提取仪: KingFisher Flex(自动化提取效率≥95%)

9. 恒温混匀仪: ThermoMixer C(温度范围-10°C至100°C)

10. 冷冻干燥机: Christ Alpha 1-2 LDplus(冻干时间≤24小时)

11. 超净工作台: Esco Airstream(无菌级别Class 100)

12. 恒温培养箱: Memmert IN110(温控精度±0.1°C)

13. 振荡器: IKA KS 260(振幅可调范围0-50mm)

14. 微量加样器: Eppendorf Research plus(体积范围0.1μL-1000μL,精度±0.5%)

15. 生物安全柜: Baker SG603(气流速度≥0.5m/s)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

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