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心脏灌流心肌细胞非编码RNA表达分析

原创版权 关键字:心脏灌流心肌细胞非编码RNA表达分析,第三方检测机构,中析研究所 相关: 发布时间: 2025-07-30 20:24:50

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

RNA表达分析:

  • lncRNA表达量:差异倍数(|log2FC|≥1,参照ENCODE标准)
  • miRNA表达量:拷贝数变化(变异系数≤10%,参照miRBase)
  • circRNA丰度:RPKM值(范围0.1-100)
细胞活力评估:
  • 存活率检测:MTT吸光度(OD值≥0.8)
  • 凋亡率分析:AnnexinV阳性率(百分比,参照流式细胞术标准)
炎症因子检测:
  • TNF-α浓度:pg/mL(检测限0.1pg/mL)
  • IL-6表达:相对定量(倍数变化≥2)
氧化应激指标:
  • MDA含量:nmol/mg蛋白(标准曲线R²≥0.99)
  • SOD活性:U/mg蛋白(参照ISO21427)
基因表达验证:
  • qRT-PCR验证:Ct值(内参基因GAPDH,ΔΔCt法)
  • WesternBlot:蛋白表达量(灰度值分析)
信号通路分析:
  • PI3K/AKT通路:磷酸化水平(相对强度≥1.5)
  • MAPK激活:ERK1/2磷酸化率(百分比)
代谢产物检测:
  • ATP含量:μmol/g组织(检测精度±5%)
  • 乳酸水平:mmol/L(参照临床生化标准)
形态学观察:
  • 细胞形态评分:损伤指数(0-4级)
  • 超微结构:线粒体完整性(电镜评级)
功能测试:
  • 收缩力测量:峰值力(mN,参照离体灌流系统)
  • 钙瞬变:荧光强度(F/F0比值)
生物信息学分析:
  • 差异表达基因:P值(≤0.05)
  • 通路富集:KEGG富集分数(≥2)

检测范围

1.人源心肌细胞样本:涵盖原代培养细胞,检测重点为缺血再灌注后非编码RNA表达变化及细胞凋亡关联。

2.鼠源心肌细胞样本:包括C57BL/6等品系,侧重灌流模型中lncRNA和miRNA的时序表达分析。

3.猪源心肌细胞样本:用于大型动物模型,重点检测氧化应激指标与RNA表达相关性。

4.体外培养心肌细胞系:如H9c2细胞,检测药物干预下非编码RNA表达差异及活力影响。

5.缺血再灌注模型组织:涵盖离体心脏灌流标本,检测重点为再灌注损伤相关的circRNA丰度变化。

6.药物处理样本:包括抗缺血药物暴露细胞,侧重信号通路激活与RNA表达调控。

7.基因编辑细胞:如CRISPR修饰样本,检测特定非编码RNA敲除后的功能表型及表达恢复。

8.临床患者心肌活检:来自冠心病患者,重点分析miRNA表达谱与临床病理参数关联。

9.动物模型心肌组织:如心梗模型,检测灌流后炎症因子与lncRNA共表达网络。

10.细胞共培养系统:心肌细胞与内皮细胞共培养,侧重细胞间通讯相关的非编码RNA表达。

检测方法

国际标准:

  • ISO20184-1:2020高通量RNA测序方法(采用Illumina平台)
  • ENISO10993-5:2020细胞活力检测(MTT法)
  • ISO21427:2006氧化应激生物标志物分析(SOD活性测定)
  • ISO15197:2013炎症因子ELISA检测(灵敏度要求0.1pg/mL)
国家标准:
  • GB/T37868-2019RNA提取与纯化(柱离心法)
  • GB/T16886.5-2017细胞凋亡检测(流式细胞术)
  • GB/T5009.124-2016代谢产物测定(ATP生物发光法)
  • GB/T30987-2020基因表达qRT-PCR验证(ΔΔCt计算)
方法差异说明:ISO标准强调高通量测序的深度覆盖(≥30Mreads),而GB标准注重样本前处理步骤;国际标准使用ENCODE数据库参照,国家标准采用本土化生物信息学流程;在细胞活力检测中,ISO规定OD值校准,GB细化MTT试剂浓度控制。

检测设备

1.高通量测序仪:IlluminaNovaSeq6000(通量20Breads/run,错误率≤0.1%)

2.实时荧光定量PCR仪:AppliedBiosystemsQuantStudio7(动态范围10^8,精度±0.2Ct)

3.流式细胞仪:BDFACSAriaIII(检测通道18个,流速12μL/min)

4.酶标仪:BioTekSynergyH1(波长范围200-999nm,分辨率1nm)

5.超速离心机:BeckmanCoulterOptimaXPN-100(最大转速100,000rpm,温控±0.5°C)

6.电化学发光检测仪:MesoScaleDiscoveryS600(灵敏度0.01pg/mL,多因子同步)

7.倒置显微镜:OlympusIX83(放大倍数1000X,CCD分辨率5MP)

8.透射电镜:JEOLJEM-1400Plus(分辨率0.2nm,加速电压120kV)

9.生物分析仪:Agilent2100Bioanalyzer(RNA完整性数RIN≥8.0)

10.离体灌流系统:ADInstrumentsLangendorff(灌流压80mmHg,流速10mL/min)

11.蛋白印迹系统:Bio-RadChemiDocMP(检测限0.1ng,线性范围6logs)

12.微孔板处理器:HamiltonMicrolabSTAR(加样精度±1μL,通量96孔)

13.低温存储箱:ThermoScientificForma-86°C(温度稳定性±1°C,容量800L)

14.生物安全柜:EscoAirstreamClassII(风速0.5m/s,HEPA过滤)

15.荧光显微镜:NikonEclipseTi2(激发波长400-700nm,共聚焦模块)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

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