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ABA含量干旱诱导分析

原创版权 关键字:ABA含量干旱诱导分析测试周期,ABA含量干旱诱导分析测试范围,ABA含量干旱诱导分析测试标准 相关: 发布时间: 2025-07-30 19:36:01

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

ABA含量定量检测:

  • 叶片ABA含量:高效液相色谱(HPLC)法测定(ng/gFW,参照ISO11046:2019)、酶联免疫吸附(ELISA)法验证(pmol/gDW,偏差≤±5%)
  • 根系ABA含量:液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法测定(pg/gDW,检测限0.01pg)、气相色谱(GC)法辅助校准(ng/gDW,RSD≤3%)
干旱胁迫处理参数:
  • 土壤水分控制:称重法维持土壤相对含水量(SRWC/%,设定梯度30±5%、50±5%、70±5%)
  • 叶片水势:压力室法测定(ψw/MPa,参照ASTMD2216-19)、露点水势仪验证(精度±0.02MPa)
  • 胁迫持续时间:分期处理(7天、14天、21天),记录叶片萎蔫指数(0-5级)
ABA代谢酶活性分析:
  • 合成酶活性:9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)活性(nmol·mg⁻¹·h⁻¹,参照GB/T38082-2019)、脱落酸醛氧化酶(AAO)活性(μmol·g⁻¹·min⁻¹,比色法)
  • 分解酶活性:ABA8'-羟化酶(CYP707A)活性(pmol·mg⁻¹·min⁻¹,同位素示踪法)、β-葡萄糖苷酶(BG)活性(U/gFW,PNPG底物法)
ABA时空分布检测:
  • 细胞层面定位:激光共聚焦显微镜观察ABA-GFP荧光探针(分辨率0.1μm,激发波长488nm)
  • 组织层面分布:免疫组织化学(IHC)染色分析(茎部维管束/薄壁细胞,抗体效价1:1000)
  • 器官层面差异:荧光定量PCR(qPCR)测定根、茎、叶ABA含量比值(FPKM值对比)
干旱响应基因表达分析:
  • 合成基因:NCED1/3基因相对表达量(2⁻ΔΔCt法,参照MIQEguidelines)、PSY基因转录水平(RNA-seq,FPKM≥1)
  • 调控基因:ABF转录因子表达量(qPCR,倍数变化≥2倍)、SnRK2激酶活性(磷酸化水平,Westernblot)
渗透调节物质协同检测:
  • 脯氨酸含量:磺基水杨酸提取-比色法测定(μg/gFW,参照GB/T23742-2009)、高效液相色谱(HPLC)法验证(μmol/gFW,RSD≤2%)
  • 可溶性糖含量:蒽酮硫酸法测定(mg/gFW,波长620nm)、离子色谱(IC)法分离(单糖/双糖组分,检测限0.01mg/L)
  • 甜菜碱含量:HPLC法测定(μmol/gFW,流动相甲醇-水=80:20)、核磁共振(NMR)法定性(δ3.2-3.5ppm特征峰)
抗氧化系统关联分析:
  • 酶活性测定:超氧化物歧化酶(SOD)活性(NBT光化还原法,U/gFW,参照GB/T5009.176-2016)、过氧化氢酶(CAT)活性(高锰酸钾滴定法,μmol·g⁻¹·min⁻¹)
  • 氧化产物含量:丙二醛(MDA)含量(TBA法,nmol/gFW,波长532nm)、过氧化氢(H₂O₂)含量(比色法,μmol/gFW,钒酸盐法)
气孔行为与ABA相关性检测:
  • 气孔导度:Li-Cor6400XT气孔计测定(mol·m⁻²·s⁻¹,范围0-10)、扫描电镜(SEM)观察气孔形态(μm,分辨率10nm)
  • 气孔开度:显微镜测量(μm,目镜测微尺)、ABA处理后气孔关闭速率(min⁻¹,时间梯度0-60min)
根系ABA合成能力检测:
  • 根系NCED酶活性:分光光度法测定(nmol·mg⁻¹·h⁻¹,底物紫黄质)、同位素标记法验证(¹⁴C-紫黄质转化率)
  • 根系ABA前体含量:HPLC法测定紫黄质(ng/gDW)、β-胡萝卜素(μg/gDW,参照ISO21125:2019)
地上部ABA运输效率检测:
  • 韧皮部汁液ABA含量:EDTA法收集汁液(ng/mL,参照PlantPhysiologyProtocol)、ELISA法测定(pmol/mL,回收率≥85%)
  • ABA运输速率:同位素示踪法(³H-ABA)测定(cm/h,检测范围0-50)、嫁接试验验证(砧木/接穗ABA比值)
ABA与其他激素协同检测:
  • 生长素(IAA)协同:LC-MS/MS法测定IAA/ABA比值(参照ISO16308:2014)、高效液相色谱(HPLC)法分离(保留时间差≤0.5min)
  • 赤霉素(GA₃)拮抗:酶联免疫(ELISA)法测定GA₃含量(ng/gFW)、计算GA₃/ABA比值(阈值≤0.5为抗逆响应启动)

检测范围

1.农作物品种:涵盖小麦、玉米、水稻等主栽品种,重点检测灌浆期干旱胁迫下旗叶ABA含量变化及与产量的相关性

2.园艺作物:包括番茄、黄瓜、草莓等设施栽培作物,侧重果实发育阶段ABA对干旱的响应机制及品质调控作用

3.木本植物:杨树、柳树、松树等用材林树种,重点分析根系ABA合成与地上部生长的协同关系及耐旱性遗传规律

4.草本花卉:菊花、非洲菊、矮牵牛等观赏植物,检测干旱诱导下花瓣ABA含量与花期调控、花色稳定性的关联

5.耐盐植物:盐角草、碱蓬等盐生植物,侧重ABA与盐胁迫交叉响应中的含量变化及耐盐基因调控网络

6.转基因植物:转NCED基因、CYP707A基因等抗逆转基因植株,验证目的基因对ABA含量的调控效果及田间耐旱性表现

7.野生植物资源:沙漠锦鸡儿、梭梭等野生抗逆植物,挖掘ABA代谢途径中的关键调控位点及未开发的抗逆基因资源

8.药用植物:黄芪、当归、枸杞等药用作物,重点检测干旱对药用成分(如黄芪甲苷、枸杞多糖)积累与ABA含量的相关性

9.牧草品种:紫花苜蓿、羊草等饲用牧草,分析干旱胁迫下ABA与牧草产量、粗蛋白含量及适口性的关系

10.沙漠植物:仙人掌、龙舌兰等多肉植物,检测CAM途径中ABA对气孔开闭的调控机制及夜间CO₂固定效率的影响

检测方法

国际标准:

  • ISO11046:2019植物激素测定—高效液相色谱法(规定HPLC柱型为C18,流动相甲醇-0.1%甲酸水溶液=60:40)
  • ISO22662:2021酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定植物激素含量(要求抗体特异性≥95%,交叉反应≤5%)
  • ASTMD2216-19土壤水势测定—压力室法(适用于植物叶片水势检测,精度±0.01MPa)
国家标准:
  • GB/T38082-2019植物激素测定—液相色谱-质谱联用法(推荐使用电喷雾离子源,正离子模式检测ABA)
  • GB/T23742-2009植物中脯氨酸含量的测定(采用磺基水杨酸提取,比色法检测,提取率比国际标准高15%)
  • GB/T5009.176-2016植物中超氧化物歧化酶活性的测定(NBT光化还原法,波长560nm,灵敏度0.01U/g)
方法差异说明:国际标准ISO11046:2019推荐HPLC法测定ABA含量,流动相为甲醇-0.1%甲酸;而国家标准GB/T38082-2019采用LC-MS/MS法,流动相为乙腈-0.1%甲酸,检测限更低(0.01pgvs0.1ng),但成本更高。ASTMD2216-19用于叶片水势检测时,要求样品采集后2小时内测定;GB/T38082-2019则允许4℃冷藏保存至24小时,更适合田间大面积采样。

检测设备

1.高效液相色谱仪:Agilent1260InfinityII(配备DAD检测器,波长范围190-900nm,流速0.8mL/min,柱温30℃)

2.液相色谱-质谱联用仪:ThermoFisherQExactive(电喷雾离子源,质量范围50-1500m/z,分辨率70000FWHM)

3.酶联免疫检测仪:Bio-RadModel680(波长范围400-750nm,灵敏度0.001OD,板间变异系数≤3%)

4.激光共聚焦显微镜:LeicaTCSSP8(405nm、488nm、552nm激光源,扫描速度8fps,分辨率0.1μm)

5.实时荧光定量PCR仪:AppliedBiosystemsStepOnePlus(荧光通道FAM、VIC、ROX,扩增效率95%-105%,检测限1copies/μL)

6.植物水势仪:WescorPSYPRO(测量范围-30-0MPa,精度±0.01MPa,样品室容量10mL)

7.气孔计:Li-Cor6400XT(气孔导度范围0-10mol·m⁻²·s⁻¹,分辨率0.001mol·m⁻²·s⁻¹,CO₂浓度控制范围0-2000μmol/mol)

8.同位素比值质谱仪:ThermoFisherDeltaVAdvantage(检测精度δ¹³C±0.1‰,δ¹⁸O±0.2‰,离子源温度1300℃)

9.紫外可见分光光度计:ShimadzuUV-2600(波长范围190-900nm,吸光度范围0-4A,分辨率0.1nm)

10.超低温离心机:Eppendorf5430R(最大转速15000rpm,离心力21130×g,温度范围-10℃-4℃)

11.组织匀浆机:IKAT18basic(转速范围10000-30000rpm,处理量0.5-100mL,配备不锈钢/玻璃匀浆刀)

12.电子天平:MettlerToledoXS205(最大称量220g,可读性0.01mg,重复性±0.02mg)

13.恒温水浴锅:HuberCC-100(温度范围-10℃-100℃,精度±0.1℃,容量10L)

14.植物生长箱:ConvironPGX-1000(光照强度0-1500μmol·m⁻²·s⁻¹,温度范围10℃-40℃,湿度范围40%-90%)

15.根系扫描系统:WinRHIZOPro2020(扫描分辨率400dpi,根长测量精度±0.1mm,可分析根直径、根毛密度)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

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