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线粒体自噬水平荧光标记定量检测

原创版权 关键字:线粒体自噬水平荧光标记定量检测,第三方检测机构,中析研究所 相关: 发布时间: 2025-07-28 11:47:33

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

荧光信号检测:

  • 平均荧光强度:相对荧光单位(RFU),背景扣除值(≤100RFU)
  • 荧光分布:变异系数(CV≤20%),信噪比(SNR≥3)
自噬体定量:
  • 自噬体数量:每细胞平均计数(≥5个),尺寸范围(直径0.5-2.0μm)
  • 自噬体密度:单位面积计数(个/μm²,参照ISO20391)
自噬流测定:
  • 自噬速率:单位时间变化率(%/h),溶酶体融合效率(≥70%)
  • 衰减曲线:半衰期(t1/2,h),诱导时间点(24-48h)
线粒体完整性评估:
  • 线粒体膜电位:ΔΨm值(mV),异常形态比例(≤10%)
  • 线粒体肿胀指数:体积变化率(%,参照GB/T27401)
蛋白质表达分析:
  • LC3-II/LC3-I比率:比值(≥1.5),PINK1表达量(foldchange)
  • Parkin活性:泛素化水平(相对单位)
细胞活力关联:
  • 细胞存活率:MTT吸收率(≥80%),凋亡指数(Caspase-3活性≤15%)
  • 增殖抑制率:IC50值(μM)
时间动力学分析:
  • 自噬诱导动力学:时间常数(τ,min),峰值时间(h)
  • 持续监测:间隔采样频率(每5min)
剂量反应关系:
  • EC50值:半数有效浓度(μM),Hill系数(斜率因子)
  • 最大响应:Emax值(%)
质量控制参数:
  • 重复性:相对标准偏差(RSD≤15%),批间差异(CV≤10%)
  • 线性范围:检测限(LOD0.1RFU),定量限(LOQ1RFU)
统计分析:
  • 显著性差异:p值(<0.05),相关性系数(Pearsonr≥0.8)
  • 置信区间:95%CI宽度(±5%)

检测范围

1.HEK293细胞系:重点检测基础自噬水平及药物诱导响应,确保细胞状态一致性。

2.HeLa细胞:评估癌症模型中自噬调控机制,侧重基因表达变化。

3.原代神经元:分析神经退行性疾病相关自噬缺陷,关注线粒体健康度。

4.心肌细胞:检测缺血再灌注损伤中线粒体自噬动态,强调膜电位稳定性。

5.肝组织切片:量化肝病模型自噬激活程度,聚焦组织穿透深度。

6.小鼠脑组织:活体成像应用,监测在体自噬过程,确保样本新鲜度。

7.分离线粒体:纯化线粒体的自噬受体结合效率,验证纯度≥95%。

8.固定细胞样本:长期保存样本的自噬标记稳定性,控制固定时间≤24h。

9.基因编辑细胞:CRISPR/Cas9编辑后自噬功能验证,靶向基因敲除效率。

10.临床血样:外周血单核细胞自噬水平监测,处理流程标准化。

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-5:2009体外细胞毒性测试(细胞活力测定)
  • ISO20391-1:2018流式细胞术性能标准(荧光信号校准)
  • ISO17025:2017测试和校准实验室能力要求(质量控制方法)
国家标准:
  • GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验(细胞存活率检测)
  • GB/T27401-2008实验室质量控制规范分子生物学检测(蛋白质表达分析)
  • GB/T37864-2019生物样本库质量和能力要求(样本处理规范)
方法差异说明:国际标准ISO20391强调流式细胞仪校准精度(±2%),而国家标准GB/T27401对温控要求更严格(±0.5°C);ISO10993-5细胞毒性测试采用直接接触法,GB/T16886.5则指定间接提取法,灵敏度差异在5%以内。

检测设备

1.倒置荧光显微镜:OlympusIX83(分辨率0.2μm,荧光通道4个)

2.流式细胞仪:BDFACSAriaIII(检测限1000events/s,激光波长488nm)

3.共聚焦显微镜:ZeissLSM980(Z轴分辨率0.5μm,活细胞成像速度1fps)

4.微孔板阅读器:BioTekSynergyH1(波长范围200-1000nm,精度±1%)

5.实时PCR仪:AppliedBiosystems7500(动态范围10^7,精度99%)

6.细胞培养箱:ThermoScientificHeracell150i(温度控制±0.1°C,CO2浓度5%)

7.高速离心机:Eppendorf5430R(最大转速15000rpm,温控范围-20°C至40°C)

8.冷冻切片机:LeicaCM1950(切片厚度5-50μm,精度±1μm)

9.紫外可见光谱仪:PerkinElmerLambda35(波长精度±0.5nm,带宽2nm)

10.活细胞成像系统:NikonBioStationIM-Q(时间间隔1s-1h,温度稳定性±0.2°C)

11.电转染仪:Bio-RadGenePulserXcell(电压范围100-3000V,脉冲宽度10ms)

12.酶标仪:MolecularDevicesSpectraMaxi3x(检测模式6种,灵敏度1fM)

13.低温冰箱:HaierDW-86L626(存储温度-80°C,容量626L)

14.纯水系统:Milli-QAdvantageA10(电阻率18.2MΩ·cm,流速2L/min)

15.生物安全柜:EscoAirstreamAC2-4E1(风速0.5m/s,HEPA过滤效率99.99%)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

本文链接:https://www.yjser.com/huanjingjiance/24000.html

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