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透射电镜亚细胞结构损伤分析

原创版权 关键字:透射电镜亚细胞结构损伤分析,第三方检测机构,中析研究所 相关: 发布时间: 2025-07-28 11:36:27

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

线粒体损伤检测:

  • 线粒体嵴完整性:嵴断裂率(%)、嵴融合状态(融合/分裂比例)
  • 线粒体基质密度:电子致密度变化(灰度值差,参照ISO13099-1)
  • 线粒体肿胀程度:截面积增大比例(%,与正常组比较)
内质网应激分析:
  • 内质网腔扩张程度:腔直径增加百分比(%)
  • 核糖体脱落率:游离核糖体数量/总核糖体数量(%)
  • 内质网相关蛋白聚集:GRP78免疫金标记密度(个/μm²)
细胞核形态学评估:
  • 核膜完整性:核膜破损率(%)、核膜凹陷深度(μm)
  • 染色质浓缩程度:异染色质比例(%,参照GB/T27788)
  • 核仁形态:核仁碎裂率(%)、核仁消失率(%)
溶酶体功能检测:
  • 溶酶体膜稳定性:酸性磷酸酶漏出率(%)
  • 溶酶体数量变化:单位面积内溶酶体数量(个/μm²)
  • 溶酶体与自噬体融合率:共定位荧光强度比(%,参照ASTME1922)
高尔基体结构观察:
  • 高尔基体堆叠层数:层数减少比例(%,正常4-8层)
  • 高尔基小泡分布:周边小泡数量密度(个/μm²)
  • 高尔基体膜断裂情况:膜连续性评分(1-5分,1为完整)
细胞骨架完整性分析:
  • 微管蛋白聚合状态:微管纤维束完整性(%)
  • 肌动蛋白丝排列:平行度评分(1-5分,1为完全平行)
  • 中间纤维网络连续性:vimentin免疫标记阳性率(%)
过氧化物体损伤评估:
  • 过氧化物体数量:单位细胞内数量(个/细胞)
  • 过氧化氢酶活性:电镜细胞化学染色密度(灰度值,参照EMSA2021)
  • 过氧化物体膜完整性:膜破损率(%)
自噬体形成监测:
  • 自噬体数量:单位面积内数量(个/μm²)
  • 自噬体包裹内容物:细胞器包裹率(%)、蛋白聚集体包裹率(%)
  • 自噬体与溶酶体融合率:共定位率(%,参照GB/T38471)
细胞膜完整性检测:
  • 细胞膜表面微绒毛数量:减少比例(%)
  • 细胞膜漏洞形成:直径>0.1μm的孔洞数量(个/细胞)
  • 细胞膜磷脂双分子层完整性:电子密度均匀性(变异系数,≤0.1)
胞质细胞器空间分布分析:
  • 线粒体与内质网接触位点数量:每μm内质网长度接触点数(个/μm)
  • 高尔基体与内质网距离:平均距离变化(μm,与正常组比较)
  • 溶酶体与线粒体空间关联度:共定位系数(≥0.5为关联密切)

检测范围

1.哺乳动物细胞系:涵盖HepG2(肝细胞)、HeLa(宫颈癌细胞)、MCF-7(乳腺癌细胞)等,重点检测药物诱导的线粒体损伤及内质网应激

2.原代细胞:包括小鼠肝细胞、大鼠心肌细胞、人脐静脉内皮细胞(HUVEC),侧重生理状态下的细胞核形态变化及细胞骨架完整性

3.动物组织样本:涉及肝、肾、脑、心肌等组织切片,重点分析病理条件(如肝硬化、脑缺血)下的溶酶体功能及高尔基体结构损伤

4.植物细胞:包括拟南芥叶肉细胞、水稻根细胞、烟草BY-2细胞,侧重逆境胁迫(如干旱、重金属)下的细胞骨架完整性及过氧化物体损伤

5.微生物细胞:涵盖酵母菌(Saccharomycescerevisiae)、大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌,重点检测抗生素作用后的细胞膜完整性及自噬体形成

6.肿瘤细胞:包括肺癌A549细胞、乳腺癌MDA-MB-231细胞、结肠癌细胞HT-29,侧重化疗药物诱导的自噬体-溶酶体融合率及细胞核浓缩程度

7.干细胞:涵盖胚胎干细胞(ESC)、间充质干细胞(MSC)、神经干细胞(NSC),重点评估分化过程中的细胞器发育(如线粒体嵴形成)及空间分布

8.神经细胞:包括大鼠皮层神经元、小鼠海马神经元、PC12细胞(嗜铬细胞瘤细胞),侧重缺氧/缺血后的高尔基体损伤及胞质细胞器空间分布变化

9.免疫细胞:涵盖T淋巴细胞、巨噬细胞(RAW264.7)、树突状细胞(DC),重点检测激活状态下的溶酶体功能及线粒体-内质网接触位点数量

10.昆虫细胞:包括Sf9(草地贪夜蛾细胞)、HighFive(粉纹夜蛾细胞),侧重病毒感染后的过氧化物体损伤及自噬体形成

检测方法

国际标准:

  • ISO13099-1:2019透射电镜生物样本制备指南(强调冷冻替代法的温度控制,-90℃至-60℃,置换时间12-24h)
  • ASTME1922-19生物材料透射电镜分析规程(要求样品厚度60-80nm,精度±5nm,推荐使用10nm金颗粒免疫标记)
  • EMSA2021亚细胞结构电镜检测共识(建议结合荧光电镜验证共定位,共定位系数≥0.7为有效关联)
国家标准:
  • GB/T33839-2017生物样品透射电子显微镜检验方法(允许室温化学固定(4%戊二醛),样品厚度50-100nm,偏差±10nm)
  • GB/T27788-2011细胞超微结构观察技术规范(规定染色质浓缩程度计算采用灰度阈值法,阈值设置为128,异染色质比例≥30%为浓缩)
  • GB/T38471-2020透射电镜样品制备及观察指南(推荐使用冷冻置换系统(-150℃至25℃),脱水剂纯度要求≥99.9%,每步脱水停留10-15min)
方法差异说明:ISO13099-1与GB/T33839的核心差异在于样品固定方式,前者强调冷冻固定以保留更真实的亚细胞结构(如线粒体嵴的原始形态),后者允许化学固定以简化操作(适用于常规样本);ASTME1922与GB/T27788在样品厚度要求上略有不同,前者更严格(60-80nm)以提高图像分辨率,后者允许更宽的范围(50-100nm)以适应不同样本的硬度;EMSA2021与GB/T38471均推荐冷冻置换,但前者要求更长的置换时间(24h)以确保置换充分,后者为12-24h(可根据样本调整)。

检测设备

1.透射电子显微镜:JEM-2100F(场发射枪,加速电压200kV,点分辨率0.19nm,线分辨率0.102nm,最大放大倍数1,500,000×)

2.透射电子显微镜:FEITecnaiG2F20(场发射枪,加速电压200kV,物镜球差校正,最大放大倍数2,000,000×)

3.透射电子显微镜:HitachiH-7650(热发射枪,加速电压100kV,最大放大倍数600,000×,适合常规样本观察)

4.超薄切片机:LeicaEMUC7(钻石刀,切片厚度50-100nm,精度±2nm,可实现自动连续切片)

5.冷冻置换系统:QuorumPP3010T(温度范围-150℃至25℃,置换时间12-24h,兼容丙酮、乙醇等置换液)

6.离子溅射仪:JEOLJFC-1600(溅射材料Au/Pd合金(80:20),溅射电流1-10mA,膜厚0.5-20nm,用于样品导电处理)

7.等离子清洗机:EMSPELCOeasiGlow(等离子气体Ar/O2混合(90:10),功率10-100W,处理时间1-60s,用于去除样品表面污染物)

8.共聚焦显微镜:Bio-RadZEISSLSM880(激光波长405-633nm,分辨率150nm,用于荧光标记(如GFP、RFP)的亚细胞定位)

9.超速离心机:ThermoScientificSorvallWXUltra(最大转速100,000×g,离心力1,100,000×g,用于细胞器(如线粒体、溶酶体)分离)

10.原子力显微镜:BrukerNanoScopeVIII(接触模式/轻敲模式,分辨率0.1nm,用于样品表面形貌预分析(如细胞膜微绒毛))

11.气相色谱仪:Agilent7890B(色谱柱HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm),检测限0.01%,用于脱水剂(如乙醇、丙酮)的纯度分析)

12.冷冻断裂系统:Bal-TecBAF060(温度-150℃,断裂速度1-10mm/s,用于细胞膜结构(如磷脂双分子层)分析)

13.光学显微镜:OlympusBX53(相差显微镜,放大倍数100-400×,用于半薄切片(1μm)的定位(如找到目标细胞))

14.脱水机:LeicaEMCP3(梯度脱水,乙醇浓度30%-100%(每步递增10%),每步停留10-15min,用于样本脱水处理)

15.染色机:LeicaEMAC20(铀染(2%醋酸铀)/铅染(枸橼酸铅)自动染色,染色时间5-15min,温度25℃,用于提高样品对比度)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

本文链接:https://www.yjser.com/huanjingjiance/23993.html

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