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心脏灌流心肌细胞外泌体miRNA检测

原创版权 关键字：心脏灌流心肌细胞外泌体miRNA检测，第三方检测机构，中析研究所 相关: 发布时间： 2025-07-28 08:59:58

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

外泌体分离与表征：

  • 粒径分布：30-150nm范围（参照ISEV指南）
  • 浓度检测：颗粒数≥1×108/mL（NTA法）
  • 标志物检测：CD63+、TSG101+、Calnexin-（WB或流式）
RNA提取与质控：
  • 总RNA纯度：OD260/280≥1.8（Nanodrop）
  • RNA完整性：RIN值≥7.0（Bioanalyzer）
  • microRNA得率：≥0.5pg/μL（QubitHSAssay）
miRNA定量分析：
  • 绝对定量：拷贝数/μL（dPCR，ddCt法）
  • 相对表达：2-ΔΔCt（qRT-PCR，参照U6snRNA）
  • 检测限：≤10copies/reaction（探针法）
差异表达谱：
  • 高通量筛查：miRNAPanel（≥800种，NGS平台）
  • 差异倍数：|log2FC|≥1.0（P<0.05，DESeq2）
  • 聚类分析：Hierarchicalclustering（Euclidean距离）
靶基因预测与验证：
  • 结合位点预测：种子区匹配度≥7mer（TargetScan）
  • 双荧光素酶报告基因：相对活性≤60%（P<0.01）
功能通路富集：
  • KEGG通路分析：FDR≤0.05（DAVID）
  • GO注释：生物过程/分子功能（GSEA）
心肌损伤标志物检测：
  • 特异性miRNA：miR-208b≥5copies/μL（ACS诊断）
  • 敏感性miRNA：miR-499-5p（心肌坏死）
外泌体摄取验证：
  • 荧光标记效率：DiR染料≥85%（流式细胞术）
  • 受体细胞摄取率：CFSE+细胞≥30%（共聚焦）
稳定性测试：
  • 冻融耐受性：循环3次miRNA降解率≤15%
  • -80℃储存：半衰期≥12个月（qPCR验证）
生物信息学分析：
  • ceRNA网络构建：Cytoscape（Degree≥10）
  • 预后模型：ROC曲线AUC≥0.85

检测范围

1.大鼠/小鼠心脏灌流液外泌体：离体Langendorff灌流模型提取物，重点检测缺血再灌注损伤相关miR-1/133a簇

2.人心肌细胞培养上清外泌体：AC16或iPSC来源心肌细胞，侧重缺氧复氧模型中miR-21/199表达

3.临床血清/血浆外泌体：ACS患者样本，核心筛查miR-208a/499诊断panel

4.心梗模型灌流液：冠状动脉结扎术后灌流，检测miR-214调控自噬通路

5.心力衰竭外泌体：压力超负荷模型，分析miR-423-5p生物标志物性能

6.药物干预后外泌体：二甲双胍/曲美他嗪处理组，验证miR-30e/let-7g保护机制

7.外泌体亚群分选：CD81+/AnnexinV+心肌特异性亚群miRNA测序

8.外泌体模拟物：人工脂质体装载miRNA-mimic/inhibitor功能验证

9.心肌纤维化相关外泌体：成纤维细胞来源外泌体miR-21-3p检测

10.移植心脏排斥反应监测：灌洗液外泌体miR-142-5p动态定量

检测方法

国际标准：

  • ISO20417:2021医疗器械生物学样品处理规范
  • MISEV2018细胞外囊泡分离与表征指南
  • MIQE2020qPCR实验发表规范
  • dMIQE2020数字PCR技术指南
国家标准：
  • GB/T37868-2019RNA测序文库构建方法
  • YY/T1580-2018循环microRNA检测技术要求
  • GB/T40154-2021超速离心法分离纳米颗粒
（方法差异：ISO20417要求-80℃保存≤6个月，GB/T40154规定离心力≥100,000×g；MISEV2018强制多标志物验证，YY/T1580允许单标志物初筛）

检测设备

1.超速离心机：OptimaXPN-100（最大转速100,000rpm，转头Type70Ti）

2.纳米颗粒跟踪仪：MalvernNanoSightNS300（检测范围10-2000nm，温控±0.5℃）

3.数字PCR系统：Bio-RadQX200Droplet（通道数：双FAM/HEX，灵敏度0.001%）

4.实时荧光定量PCR仪：AppliedBiosystemsQuantStudio7Flex（384孔，分辨率±0.008℃）

5.高通量测序仪：IlluminaNovaSeq6000（通量20亿reads/run，Q30≥85%）

6.生物分析仪：Agilent2100Bioanalyzer（RNA完整性检测芯片）

7.超微量分光光度计：ThermoNanoDropOne（检测下限2ng/μLRNA）

8.冷冻高速离心机：Eppendorf5430R（温度范围-20~40℃，RCF≥30,000×g）

9.超低温冰箱：ThermoForma900系列（-86℃±3℃，温度波动≤1℃）

10.超声波破碎仪：CovarisM220（聚焦超声，峰值功率500W）

11.流式细胞仪：BeckmanCytoFLEXS（检测通道13色，灵敏度50nmFITC）

12.共聚焦显微镜：LeicaTCSSP8（分辨率120nm，Z轴步进10nm）

13.自动化移液系统：HamiltonSTARlet（移液精度CV≤1%）

14.电化学发光仪：MesoScaleDiscoveryQuickPlexSQ120（动态范围6logs）

15.真空浓缩仪：EppendorfConcentratorPlus（温度梯度30~70℃，真空度≤5mbar）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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