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体外过敏原毒性检测

原创版权 关键字:体外过敏原毒性检测,第三方检测机构,中析研究所 相关: 发布时间: 2025-07-25 14:52:39

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

免疫反应检测:

  • IgE结合能力测定:结合亲和力常数(Ka≥10^7M^-1,参照EAACI指南)
  • 肥大细胞活化试验:组胺释放百分比(≥20%为阳性)
  • 嗜碱性粒细胞脱颗粒:CD63表达上调率(流式细胞术检测)
细胞毒性评估:
  • 细胞活力测试:IC50值测定(MTT法,ISO10993-5)
  • 凋亡检测:AnnexinV阳性率(流式细胞术≥15%)
  • 氧化应激指标:活性氧(ROS)水平(荧光法,单位RFU)
炎症因子分析:
  • 细胞因子释放:IL-4、IL-13浓度(ELISA法,检测限1pg/mL)
  • 趋化因子测定:CCL17、CCL22表达量(qPCRCt值≤30)
  • 前列腺素E2检测:PGE2释放量(LC-MS/MS法,精度±5%)
过敏性介质测定:
  • 组胺定量:血浆组胺水平(HPLC法,范围0.1-100ng/mL)
  • 类胰蛋白酶检测:血清类胰蛋白酶浓度(免疫比浊法≥11.4μg/L)
  • 白三烯C4分析:LTC4释放量(ELISA法,检测限0.5pg/mL)
蛋白质组学分析:
  • 过敏原蛋白鉴定:分子量偏差±10%(SDS-PAGE,参照WHO/IUIS)
  • 糖基化位点检测:N-连接糖基化比例(质谱法≥50%)
  • 表位映射:线性表位数量(SPOT合成肽扫描)
基因表达检测:
  • 炎症基因表达:IL-4mRNA相对量(qPCRΔΔCt法,倍数变化≥2)
  • 受体基因分析:FcεRI表达水平(流式细胞术MFI值)
  • 转录因子激活:NF-κB磷酸化率(WesternBlot,灰度值分析)
细胞增殖抑制:
  • T细胞增殖试验:CFSE稀释指数(流式细胞术≤0.8)
  • 上皮细胞屏障功能:跨膜电阻值(TEER法,下降≥20%)
  • 成纤维细胞抑制:增殖率(BrdU法,抑制率≥30%)
酶活性测定:
  • 类胰蛋白酶活性:酶单位U/mL(比色法,ASTMF756)
  • 磷脂酶A2活性:水解率(荧光底物法,单位nmol/min)
  • 半胱天冬酶激活:Caspase-3活性(荧光法,RFU变化≥50%)
受体结合亲和力:
  • IgE受体结合:Kd值测定(表面等离子共振SPR,范围10^-9-10^-6M)
  • Toll样受体互作:TLR4激活阈值(报告基因法,EC50值)
  • 补体激活:C3a释放量(ELISA法,浓度≥100ng/mL)
氧化应激指标:
  • 谷胱甘肽水平:GSH/GSSG比率(HPLC法,≤5为阳性)
  • 过氧化氢酶活性:CAT单位(比色法,抑制率≥20%)
  • 脂质过氧化:MDA浓度(TBARS法,μmol/mg蛋白)

检测范围

1.花粉提取物:涵盖树花粉(桦树、柏树)、草花粉(梯牧草、黑麦草),重点检测特异性IgE结合活性和细胞脱颗粒率。

2.尘螨过敏原:包括屋尘螨(Derp1、Derf1)和仓储螨,侧重蛋白质变应原含量及肥大细胞激活潜力。

3.食物过敏原:如花生(Arah1)、牛奶(β-乳球蛋白)、鸡蛋(卵白蛋白),检测热稳定性、消化抵抗性及IgE交叉反应。

4.乳胶制品:天然橡胶乳胶(Hevb蛋白),评估手套、导管等医疗产品的过敏性介质释放能力。

5.药物过敏原:β-内酰胺类抗生素(青霉素G)、NSAIDs(阿司匹林),检测半抗原-蛋白结合物致敏性及T细胞反应。

6.化妆品成分:香料(肉桂醛)、防腐剂(对羟基苯甲酸酯),侧重局部致敏试验和上皮细胞毒性。

7.纺织品纤维:羊毛、合成纤维(尼龙、聚酯),检测残留染料、整理剂的皮肤致敏潜力和炎症因子诱导。

8.室内空气污染物:甲醛、挥发性有机化合物(VOCs),评估呼吸道过敏原的肥大细胞激活和氧化应激效应。

9.工业化学品:异氰酸酯(TDI)、环氧树脂,检测职业性过敏的IgE产生和细胞凋亡指标。

10.生物制剂:疫苗佐剂(铝盐)、治疗性抗体,重点评价免疫原性风险和补体激活程度。

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-10:2021医疗器械生物学评价-致敏试验(差异:使用人源细胞系)
  • ASTMF756-17乳胶蛋白质测定标准方法(差异:灵敏度0.1μg/mL)
  • OECDTG442D体外皮肤致敏检测(差异:基于ARE-Nrf2通路)
  • EURegulation1223/2009化妆品过敏原测试(差异:禁止动物试验)
  • WHO/IUIS过敏原标准化指南(差异:表位映射要求)
国家标准:
  • GB/T16886.10-2017医疗器械生物学评价-致敏试验(差异:局部淋巴结测定法)
  • GB/T5009.206-2014食品过敏原检测方法(差异:ELISA法为主)
  • GB/T3917.3-2009纺织品生物相容性测试(差异:皮肤斑贴试验替代)
  • GB/T30990-2014化妆品光毒性体外检测(差异:UV暴露参数)
  • GB/T38403-2019室内空气过敏原评估(差异:采样方法优化)
(差异说明概要:国际标准如ISO侧重人源模型,GB标准更注重本土化参数;ASTM优先SPR技术,GB常用ELISA;OECD采用通路分析,GB参考动物替代法;灵敏度范围ISO要求0.1pg/mL,GB为1pg/mL。)

检测设备

1.ELISA读取器:BioTekSynergyH1(检测范围0.001-1000ng/mL,波长范围200-999nm)

2.流式细胞仪:BDFACSCantoII(通道数14,检测限10^3细胞/mL)

3.实时荧光定量PCR仪:AppliedBiosystems7500(动态范围0.01-100ng/μL,精度±0.1Ct)

4.高效液相色谱仪:Agilent1260InfinityII(流速范围0.001-10mL/min,柱温控制±0.1°C)

5.质谱分析仪:ThermoScientificQExactive(分辨率140,000,质荷比范围50-6000)

6.表面等离子共振仪:BiacoreT200(流速范围1-100μL/min,灵敏度10RU)

7.细胞培养箱:ThermoScientificHeracell150i(温度范围4-50°C,CO2控制±0.1%)

8.多功能酶标仪:PerkinElmerEnVision(检测模式6种,RFU范围0-100,000)

9.紫外分光光度计:ShimadzuUV-2600(波长范围185-900nm,带宽0.1nm)

10.荧光显微镜:OlympusBX53(物镜放大倍数4-100X,荧光通道5个)

11.细胞毒性检测系统:MolecularDevicesSpectraMaxi3x(孔板格式384孔,温控±0.5°C)

12.蛋白质电泳系统:Bio-RadMini-PROTEANTetra(电压范围10-300V,凝胶尺寸8x10cm)

13.气体采样器:SKCAirChekTOUCH(流速50-5000mL/min,颗粒物捕获≥0.3μm)

14.恒温震荡器:EppendorfThermoMixerC(温度范围-10-100°C,震动速度300-1400rpm)

15.电化学分析仪:CHInstruments660E(电流范围±250mA,电位分辨率0.1mV)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

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