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伪狂犬病病毒检测

原创版权 关键字:伪狂犬病病毒测试标准,伪狂犬病病毒测试方法,伪狂犬病病毒测试案例 相关: 发布时间: 2025-05-21 12:06:13

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

1.病毒分离与鉴定:采用PK-15细胞系进行病毒培养,观察CPE效应(48-72小时),TCID50≥10^4.0/mL为阳性判定阈值

2.PCR核酸检测:靶向gB/gE基因片段(引物序列:F:5'-CGGGTACCTGGAGATGAAC-3';R:5'-TGCGGATCCTTACTGTTGCC-3'),扩增条件:95℃预变性5min→35循环(94℃30s,55℃30s,72℃45s)

3.ELISA抗体检测:使用IDEXXPRVgE抗体试剂盒(货号:99-09200),OD450nm值≥0.6判定为阳性

4.荧光定量PCR(qPCR):TaqMan探针法(FAM标记),Ct值≤38且扩增曲线呈典型S型为有效检出

5.中和试验(VN):固定病毒-稀释血清法(初始病毒量100TCID50),中和效价≥1:16判定为阳性

检测范围

1.动物组织样本:猪脑组织/扁桃体/脾脏(保存于50%甘油-PBS缓冲液)

2.血液样本:抗凝血(EDTA-K2抗凝)或血清样本(无溶血)

3.疫苗产品:弱毒活疫苗中gE基因缺失验证(DNA浓度≥20ng/μL)

4.环境拭子样本:养殖场栏舍/运输车辆表面拭子(含3%胎牛血清的MEM培养基保存)

5.饲料及原料:猪源性成分筛查(DNA提取量≥50μg/g)

检测方法

1.ISO4883:2018《动物病毒性疾病诊断—伪狂犬病病毒分离与鉴定》

2.GB/T22917-2008《伪狂犬病诊断技术》规定的PCR与血清学方法

3.ASTMF2312-18《动物饲料中猪源成分分子生物学检测指南》

4.OIETerrestrialManualChapter3.8.3《伪狂犬病实验室诊断标准》

5.GB/T27531-2011《伪狂犬病病毒荧光定量PCR检测方法》

检测设备

1.Bio-RadCFX96Touch实时荧光定量PCR仪(温控精度0.1℃,支持多重荧光通道)

2.ThermoFisherNanoDrop2000紫外分光光度计(测量范围2-3700ng/μLDNA)

3.EppendorfCentrifuge5424R高速冷冻离心机(最大转速14,000rpm,温控范围-9℃~40℃)

4.MemmertCO2培养箱(温度波动度0.3℃,CO2浓度控制精度0.1%)

5.OlympusCKX53倒置显微镜(400相衬观察细胞病变效应)

6.BioTekSynergyH1酶标仪(波长范围200-999nm,支持动力学扫描)

7.Sartorius纯水系统(产水电阻率≥18.2MΩcm)

8.Esco生物安全柜ClassIIA2型(风速0.3m/s20%,HEPA过滤效率99.99%)

9.HamiltonMicrolabSTARlet液体工作站(移液精度CV≤1%)

10.Agilent4200TapeStation核酸分析系统(DNA片段分辨率6-5000bp)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

本文链接:https://www.yjser.com/huanjingjiance/18266.html

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