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克罗诺杆菌检测

原创版权 关键字:克罗诺杆菌检测,第三方检测机构,中析研究所 相关: 发布时间: 2025-06-30 22:51:59

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

微生物分离与筛选:

  • 预增菌与选择性增菌:缓冲蛋白胨水(BPW)35℃±1℃孵育18h±2h,转种mLST-Vm肉汤44℃±0.5℃培养24h±2h(参照ISO 22964:2017)
  • 平板分离:克罗诺杆菌显色培养基(典型蓝绿色菌落),DFI琼脂(黄色菌落),37℃±1℃培养24h±48h
生化鉴定:
  • 关键酶活性:β-葡萄糖苷酶阳性(ESC水解),L-赖氨酸脱羧酶阴性,D-山梨醇发酵阴性(依据GB 4789.40-2016)
  • 黄色素产生:25℃~30℃培养48h,TSA斜面呈现黄色(C. sakazakii特征)
分子生物学确认:
  • 种属特异性基因检测:JianCe序列PCR扩增(目标片段大小:465bp),dnaG基因引物(Cronobacter属通用)
  • 毒力基因筛查:ompA外膜蛋白基因(菌株黏附能力),hly溶血素基因(致病性标志)
血清分型:
  • O抗原鉴定:玻片凝集试验(覆盖O1-O7血清型),重点关注O1、O2高致病血清型
药敏试验:
  • 抗生素敏感性:CLSI M45-A3标准,测试氨苄西林(MIC≤8μg/mL)、头孢噻肟(MIC≤1μg/mL)等12种药物
环境耐受性:
  • 干燥抗性测试:菌悬液涂布玻片25℃±1℃脱水,存活率测定(≥30天存活判定强耐受)
  • 热应激响应:55℃±0.5℃水浴处理10min,计算D值(典型值D55=1.2min~2.5min)
生物膜形成能力:
  • 微孔板结晶紫染色法(OD570≥0.5判为阳性),TSB培养基30℃±1℃培养48h
代谢特征分析:
  • API 20E系统:ONPG、ADH等20项生化反应(符合率≥95%)
定量检测:
  • MPN法:三级增菌(3管×3稀释度),基于EC肉汤44℃培养产气确认(参照FDA BAM Ch.29)
  • 实时荧光PCR定量:taqman探针靶向dnaG基因(检测限:100CFU/g)
菌株溯源:
  • 脉冲场凝胶电泳(PFGE):XbaI酶切,电泳参数6V/cm 120°夹角(电泳时间18h±0.5h)
  • MLST分型:7个管家基因(atpD、fusA等)序列比对

检测范围

1. 婴幼儿配方食品: 奶粉、米粉等粉状或液态产品,重点检测终产品污染及生产环节环境样品(沙门氏菌协同监测)

2. 乳制品原料: 乳清蛋白粉、脱脂乳粉等,强化干燥工艺后菌体复苏能力检测

3. 植物蛋白制品: 大豆分离蛋白、谷物基辅料,关注水分活度(aw≤0.3)下的休眠细胞检出

4. 食品添加剂: 淀粉、糊精等碳水化合物载体,需验证灭菌工艺有效性(湿热灭菌F0≥3)

5. 包装材料: 罐装奶粉内壁涂层、瓶盖密封件,检测表面生物膜形成风险(接触面RRSA培养基培养)

6. 生产环境样品: 设备接触面(传送带、料仓)、空气沉降菌,采用海绵擦拭法(取样面积25cm²)

7. 饮用水系统: 反渗透出水口、储水罐,监测膜过滤残留菌(滤膜孔径0.45μm)

8. 药用辅料: 微晶纤维素、硬脂酸镁,按USP<62>要求进行控制菌检查

9. 特殊医学用途食品: 氨基酸代谢障碍配方,强化低水分产品复苏培养基优化(TSB+0.5%丙酮酸钠)

10. 食品接触表面: 不锈钢设备管道焊缝、橡胶密封圈,采用ATP生物荧光法快速筛查(RLU≥500预警)

检测方法

国际标准:

  • ISO 22964:2017 食品和动物饲料微生物学-克罗诺杆菌属检测的水平方法
  • FDA BAM Chapter 29: Cronobacter Detection in Foods
  • USP<62> Microbiological Examination of Nonsterile Products: Tests for Specified Microorganisms
国家标准:
  • GB 4789.40-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属检验
  • SN/T 1870-2016 出口食品中克罗诺杆菌属检测方法
(方法差异:ISO标准采用mLST-Vm肉汤二次增菌,GB标准使用EE肉汤;FDA BAM要求TSA斜面25℃培养观察黄色素,SN/T标准采用TYI显色琼脂)

检测设备

1. 全自动微生物鉴定系统: VITEK 2 Compact(革兰阴性菌卡GN ID,鉴定准确率≥99%)

2. 实时荧光PCR仪: Applied Biosystems 7500 Fast(TaqMan探针检测,通量96孔)

3. 脉冲场凝胶电泳系统: CHEF Mapper XA(电压梯度6V/cm,脉冲角度120°,运行时间18h)

4. 全自动菌落计数仪: ProtoCOL 3(显色培养基菌落识别精度±5%)

5. 生物安全柜: Class II A2型(进风风速≥0.5m/s,HEPA过滤效率99.999%)

6. 恒温培养箱: 三温区独立控制(温度范围4℃~65℃,波动±0.3℃)

7. 微生物比浊仪: McFarland标准比浊管(量程0.5~4.0 McF,误差±0.01)

8. 厌氧培养系统: 气体置换型(氧浓度≤0.1%,CO2控制5%±1%)

9. 全自动酶标仪: Multiskan FC(OD值检测波长450nm/630nm,精度±0.005)

10. 冷冻离心机: 高速冷冻型(最大转速15000rpm,温控范围-20℃~40℃)

11. DNA提取工作站: 磁珠法核酸提取仪(提取效率≥95%,交叉污染率≤0.1%)

12. 显微成像系统: 数码生物显微镜(物镜100×油镜,分辨率0.2μm)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

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