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蛋白分子量检测

原创版权 关键字:蛋白分子量检测,第三方检测机构,中析研究所 相关: 生物实验外包服务 发布时间: 2025-06-30 21:45:56

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因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

检测项目

分子量测定:

  • SDS-PAGE分子量:范围10-250kDa,分辨率±5%(参照Laemmli法)
  • 质谱绝对分子量:精度±0.01Da,范围500-500,000Da(参照ISO 21348)
  • 凝胶过滤色谱分子量:偏差≤3%(SEC-HPLC法)
纯度分析:
  • 杂质含量:≤0.1%非目标蛋白(HPLC-UV法)
  • 单分子纯度:纯度≥99%(毛细管电泳法)
  • 聚集体检测:二聚体含量≤2%(DLS法)
等电点测定:
  • pI范围:4.0-10.0(IEF法)
  • 电荷异质性:变异系数≤5%(参照GB/T 38165)
  • 缓冲液兼容性:pH稳定性±0.2
糖基化分析:
  • 糖链分子量偏移:±1%(质谱法)
  • 主要糖型比例:≥80%(HILIC法)
  • 唾液酸含量:检测限0.01μg/mg
修饰检测:
  • 磷酸化位点分子量:偏差±80Da(MS/MS法)
  • 乙酰化水平:修饰度≥95%(免疫印迹法)
  • 糖基化位点:覆盖率≥90%
稳定性评估:
  • 降解分子量变化:ΔMW≤5%(加速老化试验)
  • 温度敏感性:变性温度Tm±2°C(DSC法)
  • 冻融耐受性:分子量恢复率≥98%
定量分析:
  • 蛋白质浓度:精度±2%(BCA法)
  • 分子量-浓度相关性:R²≥0.99(校准曲线法)
  • 批次一致性:CV≤3%
结构表征:
  • 片段分析:大小10-100kDa(SDS-PAGE法)
  • 二硫键完整性:还原/非还原对比(参照ASTM E2694)
  • 疏水性评估:保留时间偏移≤5%
功能性检测:
  • 分子量-活性关联:生物活性≥90%目标值(ELISA法)
  • 结合能力:KD值测定精度±10%(SPR法)
  • 酶动力学:Km值分子量相关性
样品预处理:
  • 变性条件:SDS浓度2-10%(参照GB/T标准)
  • 还原剂处理:DTT浓度10-100mM
  • 缓冲溶液兼容性:离子强度0.1-1.0M

检测范围

1. 重组蛋白: 大肠杆菌或哺乳细胞表达产物,检测重点分子量准确性和批次间一致性,确保目标分子量范围误差≤5%。

2. 单克隆抗体: IgG亚型如IgG1/IgG4,侧重轻链重链分子量比例测定(约25kDa/50kDa),验证糖基化修饰影响。

3. 酶制剂: 蛋白酶或脂肪酶样本,检测分子量稳定性(如20-100kDa范围)与活性关联,防止降解导致功能损失。

4. 疫苗抗原: 重组抗原如刺突蛋白,重点纯度分子量验证(杂质≤0.1%),确保免疫原性一致。

5. 细胞因子: IL-2或TNF-α类样本,检测分子量范围(15-20kDa)和单体比例,评估生物功能稳定性。

6. 融合蛋白: Fc融合或标签蛋白,检测融合部分分子量完整性(如75-150kDa),防止片段化。

7. 肽类激素: 小分子肽如胰岛素,分子量范围1-10kDa,需高分辨率质谱法检测精度±0.1Da。

8. 抗体药物偶联物: ADC样本,检测药物载荷分子量分布(DAR值相关),确保偶联均匀性。

9. 诊断试剂蛋白: ELISA捕获抗原或抗体,侧重分子量一致性(批次CV≤3%),保证检测特异性。

10. 研究用蛋白: 实验室纯化样本,检测分子量测定(凝胶或质谱法)和质控参数,支持结构研究。

检测方法

国际标准:

  • ISO 21348:2019 Protein molecular weight determination by SDS-PAGE
  • ASTM E2694-11 JianCe Test Method for Measurement of Protein Molecular Weight by Mass Spectrometry
  • IUPAC Technical Report Protein Analysis Guidelines
国家标准:
  • GB/T 38165-2019 蛋白质分子量测定方法 凝胶电泳法
  • GB/T 39560-2020 质谱法蛋白质分子量测定技术规范
  • GB/T 33465-2016 高效液相色谱法蛋白质纯度检测
方法差异说明:ISO标准采用固定凝胶浓度(如12%),而GB/T允许梯度优化;ASTM质谱法要求外部校准,GB/T推荐内部标准品;IUPAC与国标在样品预处理缓冲液配方存在pH差异。

检测设备

1. SDS-PAGE电泳系统: Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra Cell(电压范围50-500V,凝胶尺寸8.6x6.8cm)

2. 质谱仪: Thermo Fisher Orbitrap Fusion Lumos(分辨率240,000 at m/z 200,质量精度<1ppm)

3. 高效液相色谱仪: Agilent 1260 Infinity II(UV检测波长190-900nm,流速0.001-10mL/min)

4. 动态光散射仪: Malvern Zetasizer Nano ZS(尺寸范围0.3nm-10μm,温度控制4-90°C)

5. 等电聚焦系统: GE Healthcare IPGphor 3(pH梯度3-10,功率3000V)

6. 紫外分光光度计: Shimadzu UV-2600(波长范围190-1100nm,带宽1nm)

7. 离心机: Eppendorf Centrifuge 5425 R(最大转速15,000rpm,容量24x1.5mL)

8. 凝胶成像系统: Syngene G:BOX Chemi XX6(分辨率20MP,荧光检测通道)

9. 蛋白质纯化系统: ÄKTA pure 25(流速0.001-25mL/min,压力范围0-20MPa)

10. 圆二色光谱仪: Jasco J-1500(波长范围163-900nm,温度控制-10-110°C)

11. 表面等离子体共振仪: Biacore 8K(检测限0.1pg/mm²,流速1-100μL/min)

12. 毛细管电泳系统: Beckman Coulter PA 800 Plus(电压30kV,毛细管长度50cm)

13. 纳米颗粒跟踪分析仪: NanoSight NS300(浓度范围106-109粒子/mL)

14. 傅里叶变换红外光谱仪: Thermo Nicolet iS50(分辨率0.09cm⁻¹,波长范围7800-350cm⁻¹)

15. 微孔板读数仪: BioTek Synergy H1(检测模式:吸光、荧光、发光,波长范围220-1000nm)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

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